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    影響陽(yáng)離子脂質(zhì)材料轉染效率的常見(jiàn)因素

    更新時(shí)間:2022-06-07   點(diǎn)擊次數:778次
      陽(yáng)離子脂質(zhì)材料在經(jīng)轉染和表達過(guò)程中,有諸多因素均會(huì )影響表達效率,如細胞所處的周期、脂質(zhì)體與質(zhì)粒的比例、質(zhì)粒DNA的大小及構型、脂質(zhì)體/DNA復合物的正負電荷比例和大小等。
      
      影響因素:
      
      1、細胞所處的周期
      
      細胞轉染是一個(gè)多步驟、復雜的過(guò)程,包括細胞攝取、胞內轉運和核孔轉運。目前普遍認為抑制DNA釋放的因素以及DNA進(jìn)入細胞核的干擾因素,均對陽(yáng)性脂質(zhì)體介導基因轉染產(chǎn)生重要影響。細胞在有絲分裂時(shí),外源性DNA更容易被細胞核攝取。
      
      由此認為,DNA進(jìn)入細胞核的一個(gè)主要機制是依賴(lài)于細胞分裂時(shí)的有絲分裂被動(dòng)進(jìn)入胞核。此外,脂質(zhì)體的轉染效率還跟轉染時(shí)間、轉染細胞的類(lèi)型、轉染細胞的生長(cháng)狀態(tài)及融合程度等因素有關(guān)。
      
      2、質(zhì)粒DNA的大小及構型
      
      有相關(guān)研究把陽(yáng)離子脂質(zhì)材料作為基因載體,并將3種構型(超螺旋、開(kāi)環(huán)和線(xiàn)型)的質(zhì)粒DNA分別轉染Vero細胞,結果發(fā)現超螺旋質(zhì)粒DNA的轉染效率高。
      
      此外,也有實(shí)驗表明小于100bp的DNA片段可以在細胞質(zhì)中自由移動(dòng)。然而隨著(zhù)DNA片段的增大,其在細胞質(zhì)中的遷移能力也隨之降低。這是由于核孔對于進(jìn)入細胞核的DNA有大小限制的作用。
      
      3、脂質(zhì)體/DNA復合物的正負電荷比例和大小
      
      脂質(zhì)體/DNA復合物中兩者的正負電荷比例是影響基因轉染效率的重要因素。其中的一個(gè)重要原因是,兩者所帶電荷比例可直接影響復合物的粒徑,而當復合物的直徑尺寸在0.4-1.4um范圍內時(shí),具有較高的轉染效率。
      
      以上是影響陽(yáng)離子脂質(zhì)材料轉染效率的幾個(gè)常見(jiàn)的因素,在這些影響因素中,對無(wú)血清細胞培養基的開(kāi)發(fā)和利用無(wú)疑是提高細胞轉染效率的一條重要途徑。
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